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浅析不同部位紫玉盘总黄酮的含量测定探讨
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【关键词】 紫玉盘；,,总黄酮；,,分光光度法
摘要：目的建立紫玉盘总黄酮的含量测定方法并检测其不同部位总黄酮的含量。方法以芦丁为对照品，采用分光光度法于500 nm处测定艾纳香中总黄酮的含量。结果芦丁在0~0.076 mg/ml（r=0.999 5）范围内线性关系良好，平均回收率为99.7%，RSD＝2.3%（n=5），其叶、枝条、根含总黄酮分别为10.53%，5.60%，3.87%。结论该方法简便、准确、可靠，可作为该药材中总黄酮含量检测的方法。
关键词：紫玉盘； 总黄酮； 分光光度法
Determination of Total Flavonoids in Different Sections of Uvaria microcarpa
Abstract :ObjectiveTo develop a quantitative method for the determination of total flavonoid in different sections in Uvaria microcarpa.MethodsUsing rutin as a reference substance, the total flavonoids in Uvaria microcarpa was determined by UV absorption at 500 nm. ResultsThe linearity of rutin was obtained within the range of 0 to 0.076 mg/ml（r=0.999 5）. The average recovery was 99.7% and RSD was 2.3%. The content of total flavonoid in Uvaria microcarpa from leaf was 10.53%,branch was 5.60%, root was 3.87%(n=5).ConclusionThe method is convenient and reliable. It can be used as a quality control method to determine total flavonoids of Uvaria microcarpa.
Key words:Uvaria microcarpa； Total flavonoid； Determination
紫玉盘Uvaria microcarpa为番荔枝科紫玉盘属植物，分布于我国广西、广东和台湾等省区。紫玉盘味苦、性甘，微温，民间用于治疗消化不良，腹胀腹泻，跌打损伤，腰腿疼痛等症［1］，是常用的中药之一。近几十年来国内外学者对紫玉盘属植物中黄酮类成分进行了大量的研究，发现了该类化合物具有较强的细胞毒、抗肿瘤、抗疟、抗微生物等活性［2，3］。由于其具有很好的药理活性、药用价值高，市场开发前景好，因此对其黄酮类化合物含量进行测定，掌握其分布基本规律具有十分重要的意义，目前还未见有该药材总黄酮含量测定方法的文献报道。本实验采用分光光度法，用芦丁为对照品，以亚硝酸钠－硝酸铝为显色剂，测定紫玉盘不同部位中总黄酮的含量，方法简便、准确、可靠，可作为该药材中总黄酮的含量检测方法，结果为合理开发利用紫玉盘植物资源提供基础资料。
1 仪器与材料
1.1 材料药材采自广西防城，经广西植物研究所分类室刘演副研究员鉴定为番荔枝科紫玉盘属植物紫玉盘Uvaria microcarpa。
1.2 仪器T6新世纪紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；瑞士Precisa Bailnces Series XS电子天平（Precisa仪器有限公司）。
1.3 试剂芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所)。亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、甲醇等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品19 mg置100 ml容量瓶中，加甲醇70 ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每毫升溶液中含芦丁0.19 mg)，待用。
2.1.2 供试品溶液的制备精密称取紫玉盘药材粉末（40目）1 g，至烧瓶中，加甲醇100 ml，冷浸30 min后，在水浴上加热回流60 min，分取滤液，药渣加甲醇100 ml，继续水浴加热回流30 min，滤过，滤渣用30 ml甲醇洗涤，合并滤液，滤液置250 ml量瓶中，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，作供试品溶液，待用。
2.2 含量测定
2.2.1 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0,10.0 ml分别置于25 ml量瓶中，各加水至10 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，使混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂溶液为空白，在500 nm波长处测定吸收度。以吸收度 A为纵坐标，以对照品浓度为横坐标(mg/ml)，求得回归方程：A=11.079C+0.008 4 (r=0.999 5) ，线性范围 0~0.076 mg/ml。
2.2.2 样品的测定 分别精密吸取上述供试品溶液2 ml于25 ml量瓶中，按标准曲线的绘制项下操作，分别加入5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，4%氢氧化钠溶液10 ml及水，经放置显色后，于500 nm波长处测定吸收度，代入回归方程，计算总黄酮的含量。结果见表1。
表1 不同部位紫玉盘中总黄酮的含量（略）
2.2.3 精密度实验 取某一浓度对照品溶液2 ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后测定吸收度，连续6次，RSD值为1.70%，表明仪器精密度较好。结果见表2。
2.2.4 稳定性实验取某一供试品溶液2 ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后每隔5 min测定其吸收度，共计30 min，其测得值基本保持不变，RSD值为1.49%，表明供试品溶液在显色后30 min内基本稳定。
2.2.5 重复性实验 取同一批药材样品按供试品溶液的制备项下方法平行制备供试品溶液5份，分别取供试品溶液2 ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后测定吸收度，计算总黄酮平均含量为3.91%，RSD为1.13%，表明实验重现性良好。结果见表3。
表2 精密度实验结果（略）
表3 重复性实验结果（略）
2.2.6 回收率测定 精密称取已知总黄酮含量的药材样品5份，分别加入一定量芦丁对照品，按供试品溶液的制备项下方法制备供试品溶液，按样品的测定项下方法依法显色后测定吸收度，计算平均回收率为99.7%，RSD为2.3%。
3 讨论
3.1 采用紫外分光光度法建立测定紫玉盘药材中总黄酮含量的方法，该方法快速、简便、准确、可靠，为今后紫玉盘中总黄酮含量的检测提供了便捷方法，同时为深入开发利用紫玉盘中黄酮类成分的研究奠定了基础。经检测的紫玉盘中，叶与枝中的总黄酮含量分别高达10.53%和5.60%，因此，药材紫玉盘中黄酮类化合物具有非常重要的开发利用价值。
3.2 本实验仅考察了不同部位对紫玉盘中总黄酮含量的影响，产地、采收期等因素对紫玉盘中总黄酮及其它活性物质的动态变化影响还有待进一步研究 。
参考文献：
［1］ 江苏新医学院, 中药大辞典［M］.上海: 上海人民出版社, 1997: 3955.
［2］ Li Huuang, Maonroe, E. Wall, Mansukh C.Wai. et al. New Compounds with DNA StrandScission Activity from the Combined leaf and Stem of Uvaria hamiltonii［J］.J Nat Prod. 1998,61(4):446.
［3］ Nkunya M H, Weenen H, Bray D H, et al. An eimalarial actirity of Tanzanian plants and their actire constituents: the genus Uraria［J］. Planta Med, 1991,57(4):341
摘要：目的建立紫玉盘总黄酮的含量测定方法并检测其不同部位总黄酮的含量。方法以芦丁为对照品，采用分光光度法于500 nm处测定艾纳香中总黄酮的含量。结果芦丁在0~0.076 mg/ml（r=0.999 5）范围内线性关系良好，平均回收率为99.7%，RSD＝2.3%（n=5），其叶、枝条、根含总黄酮分别为10.53%，5.60%，3.87%。结论该方法简便、准确、可靠，可作为该药材中总黄酮含量检测的方法。
关键词：紫玉盘； 总黄酮； 分光光度法
Determination of Total Flavonoids in Different Sections of Uvaria microcarpa
Abstract :ObjectiveTo develop a quantitative method for the determination of total flavonoid in different sections in Uvaria microcarpa.MethodsUsing rutin as a reference substance, the total flavonoids in Uvaria microcarpa was determined by UV absorption at 500 nm. ResultsThe linearity of rutin was obtained within the range of 0 to 0.076 mg/ml（r=0.999 5）. The average recovery was 99.7% and RSD was 2.3%. The content of total flavonoid in Uvaria microcarpa from leaf was 10.53%,branch was 5.60%, root was 3.87%(n=5).ConclusionThe method is convenient and reliable. It can be used as a quality control method to determine total flavonoids of Uvaria microcarpa.
Key words:Uvaria microcarpa； Total flavonoid； Determination
紫玉盘Uvaria microcarpa为番荔枝科紫玉盘属植物，分布于我国广西、广东和台湾等省区。紫玉盘味苦、性甘，微温，民间用于治疗消化不良，腹胀腹泻，跌打损伤，腰腿疼痛等症［1］，是常用的中药之一。近几十年来国内外学者对紫玉盘属植物中黄酮类成分进行了大量的研究，发现了该类化合物具有较强的细胞毒、抗肿瘤、抗疟、抗微生物等活性［2，3］。由于其具有很好的药理活性、药用价值高，市场开发前景好，因此对其黄酮类化合物含量进行测定，掌握其分布基本规律具有十分重要的意义，目前还未见有该药材总黄酮含量测定方法的文献报道。本实验采用分光光度法，用芦丁为对照品，以亚硝酸钠－硝酸铝为显色剂，测定紫玉盘不同部位中总黄酮的含量，方法简便、准确、可靠，可作为该药材中总黄酮的含量检测方法，结果为合理开发利用紫玉盘植物资源提供基础资料。
1 仪器与材料
1.1 材料药材采自广西防城，经广西植物研究所分类室刘演副研究员鉴定为番荔枝科紫玉盘属植物紫玉盘Uvaria microcarpa。
1.2 仪器T6新世纪紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；瑞士Precisa Bailnces Series XS电子天平（Precisa仪器有限公司）。
1.3 试剂芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所)。亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、甲醇等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品19 mg置100 ml容量瓶中，加甲醇70 ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每毫升溶液中含芦丁0.19 mg)，待用。
2.1.2 供试品溶液的制备精密称取紫玉盘药材粉末（40目）1 g，至烧瓶中，加甲醇100 ml，冷浸30 min后，在水浴上加热回流60 min，分取滤液，药渣加甲醇100 ml，继续水浴加热回流30 min，滤过，滤渣用30 ml甲醇洗涤，合并滤液，滤液置250 ml量瓶中，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，作供试品溶液，待用。
2.2 含量测定
2.2.1 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0,10.0 ml分别置于25 ml量瓶中，各加水至10 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，使混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂溶液为空白，在500 nm波长处测定吸收度。以吸收度 A为纵坐标，以对照品浓度为横坐标(mg/ml)，求得回归方程：A=11.079C+0.008 4 (r=0.999 5) ，线性范围 0~0.076 mg/ml。
2.2.2 样品的测定 分别精密吸取上述供试品溶液2 ml于25 ml量瓶中，按标准曲线的绘制项下操作，分别加入5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，4%氢氧化钠溶液10 ml及水，经放置显色后，于500 nm波长处测定吸收度，代入回归方程，计算总黄酮的含量。结果见表1。
表1 不同部位紫玉盘中总黄酮的含量（略）
2.2.3 精密度实验 取某一浓度对照品溶液2 ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后测定吸收度，连续6次，RSD值为1.70%，表明仪器精密度较好。结果见表2。
2.2.4 稳定性实验取某一供试品溶液2 ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后每隔5 min测定其吸收度，共计30 min，其测得值基本保持不变，RSD值为1.49%，表明供试品溶液在显色后30 min内基本稳定。
2.2.5 重复性实验 取同一批药材样品按供试品溶液的制备项下方法平行制备供试品溶液5份，分别取供试品溶液2 ml，按标准曲线的绘制项下操作，依法显色后测定吸收度，计算总黄酮平均含量为3.91%，RSD为1.13%，表明实验重现性良好。结果见表3。
表2 精密度实验结果（略）
表3 重复性实验结果（略）
2.2.6 回收率测定 精密称取已知总黄酮含量的药材样品5份，分别加入一定量芦丁对照品，按供试品溶液的制备项下方法制备供试品溶液，按样品的测定项下方法依法显色后测定吸收度，计算平均回收率为99.7%，RSD为2.3%。
3 讨论
3.1 采用紫外分光光度法建立测定紫玉盘药材中总黄酮含量的方法，该方法快速、简便、准确、可靠，为今后紫玉盘中总黄酮含量的检测提供了便捷方法，同时为深入开发利用紫玉盘中黄酮类成分的研究奠定了基础。经检测的紫玉盘中，叶与枝中的总黄酮含量分别高达10.53%和5.60%，因此，药材紫玉盘中黄酮类化合物具有非常重要的开发利用价值。
3.2 本实验仅考察了不同部位对紫玉盘中总黄酮含量的影响，产地、采收期等因素对紫玉盘中总黄酮及其它活性物质的动态变化影响还有待进一步研究 。
参考文献：
［1］ 江苏新医学院, 中药大辞典［M］.上海: 上海人民出版社, 1997: 3955.
［2］ Li Huuang, Maonroe, E. Wall, Mansukh C.Wai. et al. New Compounds with DNA StrandScission Activity from the Combined leaf and Stem of Uvaria hamiltonii［J］.J Nat Prod. 1998,61(4):446.
［3］ Nkunya M H, Weenen H, Bray D H, et al. An eimalarial actirity of Tanzanian plants and their actire constituents: the genus Uraria［J］. Planta Med, 1991,57(4):341
医学论文-药学论文
